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乳腺癌类器官培养基

  • 货号:LMB-BC-100
  • 品牌:LMB
  • 规格:100ml
  • 货期:现货
  • 运输条件:2-8℃/-20℃

目录价:¥ 4600.00

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  • 产品描述

产品信息

 

产品组成

规格

储存条件及周期

1

乳腺癌类器官培养基

100ml/500ml

     -20℃可保存12个月,使用时在4℃冰箱缓慢融化,储存于 2-8℃,有效期3个月

操作步骤:

1 原代

  1. 取材后的乳腺癌组织须在2-8℃含有组织保存液的取样瓶中,快速转运至洁净实验室进行组织处理和干细胞分离,拍照并登记信息。
  2. 准备若干培养皿,加入4℃预冷的乳腺癌类器官培养缓冲液备用
  3. 取样瓶消毒,将组织放入培养皿中,利用乳腺癌类器官培养缓冲液清洗三次后,利用眼科剪或手术刀将肿瘤组织剪切成体积约为1~3mm3的组织块。
  4. 组织用乳腺癌原代组织消化液消化,37℃震荡消化10-20min,(消化过程中随时观察消化情况)。
  5. 取少量液体在显微镜下观察,镜下观察到较多的单个细胞或70μm以下的细胞簇后,加入三倍体积乳腺癌类器官培养缓冲液终止消化。
  6. 使用100μm孔径的筛网进行过滤,将滤液收集后,于300g富集离心5min后移去上清,添加乳腺癌类器官培养缓冲液重新重悬离心。
  7. 基质胶计算:第6步后观察收集到的组织体积,添加25倍组织体积的基质胶重悬铺板。
  8. 24孔细胞培养板为例,每孔点胶25ul组织基质胶混合物进行铺板(4℃下操作)。
  9. 将铺好的培养板放入37℃培养箱中10-15min成胶,添加乳腺癌类器官培养基(恢复室温)进行培养。

2 类器官传代培养

  1. 移液器吸去培养基,每孔添加1-2ml4℃类器官缓冲液放置2min
  2. 移液抢轻柔吹打基质胶,收集在15ml离心管中,4℃静置10min。(每6-8孔为一组)
  3. 1类器官数量不足或体积较小时:离心5min弃去上清,添加适量乳腺癌类器官缓冲液重悬移入1.5ml离心管,300g离心5min弃去液体进行第4步。2类器官数量较多或体积较大时:离心5min弃去上清,添加适量类器官传代消化液消化2-3min,添加乳腺癌类器官缓冲液终止消化,离心5min弃去混合液,添加适量乳腺癌类器官缓冲液重悬移入1.5ml离心管,300g离心5min弃去液体进行第4步。
  4. 类器官收集后,添加基质胶重悬,每孔25μl基质胶铺在24孔细胞培养板中,放置培养箱中10-15min添加500μl乳腺癌类器官培养基。

3、类器官冻存

       1.移液器吸去培养基,每孔添加1-2ml4℃类器官缓冲液放置2min

       2.移液抢轻柔吹打基质胶,收集在15ml离心管中,4℃静置10min。(每6-8孔为一组)

       3.离心5min弃去上清,添加适量乳腺癌类器官缓冲液再次重悬,300g离心5min弃去液体。

       4.添加适量类器官冻存液,轻柔吹打重悬,以24孔细胞培养板为例:密度为2个孔冻存1管,每管体积1.4ml

       5.做好标记信息,进行程序降温后,移入液氮长期保存,

4 类器官复苏

  1. 10ml乳腺癌类器官培养缓冲液于15ml离心管中
  2. 从液氮罐中取出冻存的类器官细胞,快速置于37℃水浴锅中融解。
  3. 水浴融解过程中,需轻轻摇动冷冻管,以确保冻存液在1-2分钟内完全融解。
  4. 将溶解后的类器官细胞快速转移至15ml离心管,使用移液管轻轻吹打6-8次,300g离心5分钟,然后除去上清液并收集类器官细胞沉淀。添加适量乳腺癌类器官缓冲液重悬移入1.5ml离心管300g离心5min
  5. 基质胶重悬,每孔25μl基质胶铺在24孔细胞培养板中,放置培养箱中10-15min成胶,添加500μl乳腺癌类器官培养基。

 

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